خطوات الاستخدام
الخطوة 1: فهم القياسات الأساسية. تمثل قراءة A260 (الامتصاص الضوئي عند 260 نانومتر) كمية الضوء التي تمتصها الأحماض النووية. يعتمد هذا القياس على أن الحمض النووي (DNA) يمتص بشدة عند هذا الطول الموجي بسبب حلقات القواعد النيتروجينية. معامل التوهين (extinction coefficient) لـ dsDNA هو 50 (ميكروغرام/مل) لكل وحدة امتصاص عند مسار ضوئي 1 سم. أي أن قيمة A260 = 1 تعادل تركيز 50 ميكروغرام/مل من DNA مزدوج الشريط عند مسار 1 سم.
الخطوة 2: إدخال قيم A260 ومعامل التخفيف (dilution factor). أدخل قراءة A260 من جهاز الطيف الضوئي (spectrophotometer). ثم أدخل معامل التخفيف الذي يمثل عدد مرات تخفيف العينة. على سبيل المثال، إذا تم تخفيف العينة 10 مرات، أدخل 10. يعد هذا التصحيح ضرورياً لأن القياس الأصلي تم على العينة المخففة، ونريد حساب تركيز العينة الأصلية. كلما زاد التخفيف، زاد التصحيح.
الخطوة 3: ضبط طول المسار الضوئي (path length). أدخل طول المسار الضوئي بالسم. معيارياً، معظم أجهزة الطيف الضوئي تستخدم مسار 1 سم. إذا استخدمت مساراً مختلفاً (مثل 0.5 سم أو 0.2 سم)، فيجب تعديل الحساب لأن الامتصاص يتناسب طردياً مع طول المسار وفق قانون بير-لامبرت. في هذه الحالة، يتم ضرب التركيز الناتج بقسمة معكوس طول المسار (1/pl).