خطوات الاستخدام
ابدأ بإدخال قيمة الامتصاصية (Absorbance) المقاسة عند طول موجة 280 نانومتر باستخدام جهاز المطياف الضوئي. تعتمد هذه الطريقة على امتصاص الأحماض الأمينية العطرية (التريبتوفان والتيروزين) للأشعة فوق البنفسجية، حيث تتناسب شدة الامتصاص طرديًا مع تركيز البروتين طبقًا لقانون بير-لامبرت. تأكد من أن العينة خالية من المواد الممتصة الأخرى مثل الأحماض النووية.
أدخل معامل الانقراض المولي (ε) للبروتين عند 280 نانومتر. يُعبر هذا المعامل عن قدرة البروتين على امتصاص الضوء لكل مول لكل سنتيمتر، ويختلف باختلاف تركيبة البروتين من الأحماض الأمينية العطرية. إذا لم تكن تعرف القيمة الدقيقة، يمكنك استخدام القيمة الافتراضية 1 (ملغم/مل لكل وحدة امتصاص) لتقدير تقريبي، لكن يُنصح باستخدام القيمة المحسوبة من التسلسل الأميني للبروتين.
حدد طول المسار البصري (l) للكوفيت المستخدم، وعادة ما يكون 1 سم. يُطبق بعد ذلك قانون بير-لامبرت: التركيز (مول/لتر) = الامتصاصية / (معامل الانقراض × طول المسار). سيحسب المحلل التركيز ويعرضه بوحدة ملغم/مل أو ميكرومول/لتر حسب المدخلات. تذكر أن هذه الطريقة تعطي تركيزًا تقريبيًا إذا لم تُصحح لتأثير التشتت أو وجود شوارد.