خطوات الاستخدام
الخطوة الأولى: أدخل قيمة الامتصاص A260 المقاسة بواسطة جهاز الطيف الضوئي. تمثل هذه القراءة كمية الضوء التي امتصتها العينة عند طول موجي 260 نانومتر، وهو الطول الموجي الذي تمتص فيه القواعد النيتروجينية للحمض النووي (DNA) الضوء بشدة. ترتبط قيمة A260 ارتباطًا مباشرًا بتركيز الحمض النووي في المحلول، حيث كلما زاد الامتصاص، زاد تركيز الحمض النووي. تأكد من أن القراءة ضمن النطاق الخطي للجهاز (عادةً بين 0.1 و 1.0) لضمان الدقة، وإذا كانت القراءة أعلى من 1.5، فمن المستحسن تخفيف العينة وإعادة القياس.
الخطوة الثانية: أدخل عامل التخفيف المستخدم عند تحضير العينة. إذا قمت بتخفيف العينة الأصلية قبل القياس، فيجب إدخال النسبة التي تم بها التخفيف. على سبيل المثال، إذا أخذت 5 ميكرولتر من العينة الأصلية وأضفت 45 ميكرولتر من الماء المقطر (مخفف 10 مرات)، فإن عامل التخفيف هو 10. يقوم هذا العامل بتصحيح التركيز المحسوب ليعبر عن تركيز العينة الأصلية غير المخففة. إذا تم القياس دون تخفيف، أدخل القيمة 1.
الخطوة الثالثة: تقوم الآلة الحاسبة بتطبيق المعامل الثابت 50 ميكروغرام/مل لكل وحدة امتصاص. هذا المعامل هو قيمة متوسطة معتمدة للحمض النووي مزدوج السلسلة (dsDNA) في كيوفيت بسمك مسار 1 سم. يعتمد هذا المعامل على أن محلول dsDNA بتركيز 50 ميكروغرام/مل يعطي امتصاصًا مقداره 1 عند 260 نانومتر. يتم حساب التركيز النهائي باستخدام الصيغة: التركيز (ميكروغرام/مل) = A260 × 50 × عامل التخفيف.