خطوات الاستخدام
الخطوة الأولى: فهم القيم المدخلة. A260 هو الامتصاص عند طول موجي 260 نانومتر، والذي يقيس تركيز الحموض النووية (DNA/RNA) لأن قواعدها النيتروجينية تمتص الضوء بشدة عند هذا الطول. A280 هو الامتصاص عند 280 نانومتر، والذي يقيس امتصاص البروتينات (خاصة الحموض الأمينية العطرية مثل التربتوفان والتيروزين) والشوائب الفينولية. لذلك، تستخدم النسبة بين هذين الامتصاصين لتقييم نقاوة عينة DNA من البروتينات.
الخطوة الثانية: حساب النسبة بقسمة قيمة A260 على A280. على سبيل المثال، إذا كانت A260=0.5 و A280=0.28، فإن النسبة = 0.5 ÷ 0.28 = 1.786. هذه النسبة هي مؤشر أساسي لنقاوة العينة. من الناحية النظرية، تعتمد النسبة على طبيعة العينة ودرجة الحموضة (pH) للمحلول؛ إذ تمتص البروتينات بقوة عند 280 نانومتر في المحاليل القلوية، لذا يُنصح بقياس الامتصاص في محلول ذي pH محايد (مثل الماء منزوع الأيونات أو محلول Tris-HCl بتركيز منخفض).
الخطوة الثالثة: تفسير النتيجة. بالنسبة لـ DNA النقي، تكون النسبة ~1.8 (تتراوح عادة بين 1.7 و1.9). إذا كانت النسبة أقل من 1.7، فهذا يشير إلى تلوث بالبروتينات أو الفينول أو غيرها من الشوائب التي تمتص عند 280 نانومتر. إذا كانت النسبة أكبر من 1.9 (خاصة >2.0)، فقد يشير ذلك إلى وجود RNA متبقي في العينة (لأن RNA النقي يعطي نسبة ~2.0)، أو إلى أن العينة مخففة جداً (أخطاء قياس). ملاحظة مهمة: النسبة المثلى تعتمد أيضاً على طريقة استخلاص DNA ونوع العينة (مثل الدم، الأنسجة، البكتيريا).