خطوات الاستخدام
الخطوة الأولى: فهم المعادلة الأساسية. تعتمد هذه الحاسبة على معادلة والاس (Wallace) لحساب درجة انصهار (Tm) الأوليغونوكليوتيدات القصيرة (أقل من 20 قاعدة). المعادلة هي: Tm = 4 × (عدد قواعد G+C) + 2 × (عدد قواعد A+T). السبب في هذا الترجيح هو أن أزواج GC ترتبط بثلاث روابط هيدروجينية، بينما أزواج AT ترتبط برابطتين فقط، مما يجعل GC أكثر استقراراً حرارياً. لذا فإن كل زوج GC يضيف حوالي 4 درجات مئوية، وكل زوج AT يضيف حوالي درجتين. هذه العلاقة خطية تقريبية وتنطبق فقط على الأوليغونوكليوتيدات القصيرة جداً.
الخطوة الثانية: إدخال القيم الصحيحة. ستحتاج إلى حساب عدد القواعد من نوع G+C في تسلسلك، وعدد القواعد A+T. إذا كان لديك تسلسل مثل 'ATGCGATC'، فاحسب G+C = 3 (G, C, G) و A+T = 5 (A, T, A, T, C). أدخل هذه الأرقام في الحقلين المخصصين. تأكد من أنك تحسب الأعداد بدقة؛ لأن أي خطأ سيؤثر على قيمة Tm النهائية.
الخطوة الثالثة: حساب Tm. تقوم الحاسبة بضرب عدد GC في 4 وعدد AT في 2 ثم تجمعهما. مثلاً إذا كان GC=10 وAT=5، فإن Tm = 4×10 + 2×5 = 40+10 = 50 درجة مئوية. هذه هي درجة الحرارة التي ينفصل عندها نصف الجزيئات المزدوجة إلى أحادية السلسلة. هذا المقياس مهم جداً في تصميم بادئات تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)، حيث يُستخدم Tm لتحديد درجة حرارة التصاق (Annealing) البادئ، والتي تكون عادة أقل من Tm بـ 3-5 درجات.